循環腫瘤細胞（CTC）稀有、難以捉摸，對於臨床診斷和癌症研究極具價值。雖然傳統的富集方法主要依賴正向選擇（即使用抗體針對 EpCAM 等表面標記），但這些方法往往會漏掉正在經歷上皮細胞-間質轉化（EMT）的亞群細胞。
無標記富集方法正透過關注細胞的物理特性而非生物化學特徵，改變液體活檢的格局。以下說明為何這種轉變對於腫瘤學的未來至關重要。
基於親和力選擇的局限性
從歷史上看，正向選擇方法一直是黃金標準，但它們存在兩個主要缺點：
依賴標記：如果腫瘤細胞下調了其目標蛋白（例如 EpCAM），富集平台將無法捕捉到它。
細胞改變：將抗體結合到細胞表面可能會觸發訊號傳導途徑或引入偏差，進而影響後續的單細胞測序或功能分析。
領先的無標記技術
無標記方法利用細胞在大小、密度、變形能力和電荷上的差異。透過使用這些內在特徵，研究人員可以分離出更廣泛的 CTC。
1. 微流體尺寸分離
透過設計複雜的微通道，研究人員可以捕獲較大的腫瘤細胞，同時讓較小的血細胞通過。諸如「螺旋微流體」之類的高級設計使用慣性聚焦，以高通量且最小化細胞損傷的方式按尺寸分離細胞。
2. 介電泳（DEP）
此方法使用非均勻電場來操縱細胞。由於與白血球相比，癌細胞通常具有不同的膜電容和細胞質電導率，DEP 可以在不接觸細胞表面的情況下精確地分選它們。
3. 微尺度過濾
與基於尺寸的微流體類似，膜過濾器利用癌細胞的剛性與紅血球和白血球的高變形能力之間的差異。孔隙幾何形狀的最新進展已經最大限度地減少了阻塞，這曾是膜過濾技術的一大挑戰。
為什麼無標記技術是未來趨勢
無標記富集提供了一個比傳統方法更能代表原發腫瘤異質性的 CTC 群體「快照」。透過捕獲 EMT 表型的細胞，研究人員可以更深入地了解標準標記通常會掩蓋的轉移潛力和藥物抗藥性機制。
此外，由於細胞保持原始狀態，它們是後續分子分析的理想候選者，包括 RNA-seq、全基因組測序（WGS）和功能性藥物敏感性檢測。
常見問題解答
無標記 CTC 富集的主要優勢是什麼？
主要優勢在於能夠捕獲異質細胞群體，包括那些已經經歷上皮細胞-間質轉化（EMT）且不表達 EpCAM 等標準表面標記的細胞。
無標記方法比基於抗體的方法準確度較低嗎？
不一定。雖然基於抗體的方法提供了高特異性，但無標記方法透過避免與目標標記表達相關的偏差，對總 CTC 負荷提供了更高的靈敏度。
我可以使用無標記富集的細胞進行測序嗎？
可以。無標記方法保留了細胞的自然狀態，使其成為單細胞 RNA 測序等靈敏後續應用的絕佳候選者。